El cultivo de tejidos vegetales se presenta como una alternativa de conservación y de propagación masiva. Dicha técnica abarca un grupo d técnicas que consisten en aislar y cultivar ciertas partes de la planta (explantes como células, tejidos y órganos y proporcionarles condiciones físicas y químicas artificiales para que expresen su capacidad morfo genética.
¿Que es un explante..?
Parte separada de un vegetal, por ejemplo: protoplasto, célula, tejido u órgano, que al ser cultivado en medio adecuado puede permitir la regeneración de plantas completas.
La elección de un explante apropiado constituye el primer paso para el establecimiento exitoso del cultivo de tejidos; dicha elección estará en función del objetivo perseguido y de la especie vegetal utilizada. El tamaño del explante es otro factor a considerar y que también va a depender del objetivo y de la especie vegetal. Un explante más grande puede favorecer la proliferación callosa o el pegue en el medio, pero también se puede producir mayor heterogeneidad y contaminación por patógenos. Existe también un tamaño mínimo debajo del cual no se obtiene la respuesta deseada. Hay que considerar además otros factores que inciden en la respuesta del explante cultivado, con son: la época del año, pretratamientos a los explantes y las condiciones de crecimiento de las plantas donantes de los mismos.
Asepsia: La asociación explante-medio y las condiciones físicas en que normalmente se incuban los cultivos conforman un ambiente propicio para la proliferación de microorganismos (bacterias, hongos), los cuales pueden destruir tales cultivos, competir con el explante por el medio de cultivo o modificarlo. Evitar las contaminaciones con microorganísmos es un aspecto básico que se debe tener en cuenta para el éxito. Para establecer cultivos asépticos es necesario: a) trabajar en ambientes adecuados; b) esterilizar los medios de cultivo; c) desinfectar superficialmente los explantes, para liberarlos de microorganísmos exógenos y d) Manejar adecuadamente las normas de asepsia.
Es generalizado el uso de etanol (70 % v/v) y de hipoclorito de sodio (NaOCl) del 1 al 3 %. Con menor frecuencia se usan el hipoclorito de calcio [Ca (OCl)]2, del 6 al 12 % y el cloruro de mercurio (HgCl2) del 0.1 al 1.5 %. En algunos casos es útil agregar algún agente tensoactivo (por ejemplo, Tween-20, del 0.01 al 0.1 %). No es necesario cuando se incluye un primer lavado con etanol. Posteriormente es necesario dar varios lavados con agua destilada estéril dentro de la cámara de flujo laminar.
Por último vale tomar en cuenta que la desinfección debe eliminar los microorganismos con el menor daño al explante.
Parte vegetal desinfectada
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Explante cultivado
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Tratamiento en hipoclorito de sodio (min.)
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Concentración de hipoclorito de sodio
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Primer lavado
(min.)
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Segundo lavado
(min.)
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Ápice caulinar
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Meristemo
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10
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0,8%
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1
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10
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Inflorescencia
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Antera
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5
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0,8%
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1
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5
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Ovario
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10
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0,8%
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1
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10
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Hoja
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Lámina foliar
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10
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1,2%
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1
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10
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Tallo
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Medula
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30
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2,0%
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1
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30
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Semilla
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Cotiledón
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10
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1,6%
|
1
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10
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Raíz
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Tubérculo
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30
|
2,0%
|
1
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30
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