Medios definidos e indefinidos

El cultivo in vitro permite el crecimiento y desarrollo de material vegetal en recipientes que lo separan del ambiente exterior y lo mantienen en condiciones controladas y asépticas. Entre las diversas técnicas de cultivo in vitro, la micropropagación consiste en la producción clonal de vegetales a partir, generalmente, de ápices o explantes nodales de una planta madre. La gran producción de nuevas plantas se ve favorecida gracias al rápido crecimiento del material vegetal in vitro y a la proliferación de tallos durante los subcultivos.

Medio definidos

1.    Medio MS: Es un preparado comercial que contiene las distintas sales mezcladas y listas para ser disueltas en medio líquido.

Sales minerals MS (Murashige and Skoog, 1962)

                                                                      (g/l)

(NH₄ )NO₃                            1.650

KNO₃                                   1.900

 CaCl₂.2H₂O                          0.440

MgSO₄.7H₂O                        0.370

KH₂PO₄                                0.170                        MS X 10

FeSO₄.7H₂O                         0.0278

Na₂EDTA. 2H₂O                  0.0372                     MS X 200

MnSO₄.H₂O                          0.0169

ZnSO₄.7H₂O                          0.0086

H₃BO₃                                   0.0062

KI                                         0.00083

Na₂MoO₄.2H₂O                     0.00025

CuSO₄.5H₂O                         0.000025

CoCl₂.6H₂O                          0.000025           MS X 100

Mioinositol                           0.100

Tiamina HCl                        0.0001

Acido nicotínico                   0.0005

Piridoxina HCl                    0.0005

Glicina                                 0.002                  MS X 200

SACAROSA                                                30 g.

AGAR-AGAR                                               7 g.

2.    MEDIO Knudson (1946): Lewis Knudson (1884-1958) fue un botánico estadounidense que dedicó su vida profesional principalmente al estudio de la biología, reproducción y propagación de las orquídeas. En el año de 1946 descubrió un medio adecuado para de orquídeas. Bastante pobre en sales.

Macronutrientes
(NH4)2SO4	0.5 g/l
MgSO4	0.122 g/l
Ca(NO3)2	0.694 g/l
KH2PO4	0.250 g/l
Micronutrientes
KI	0.83 mg/l
H3BO3	0.056 mg/l
MnSO4.H2O	5.68 mg/l
MoO3	0.016 mg/l
CuSO4.5H2O	0.062 mg/l
FeSO4.7H2O	25.0 mg/l

3.    White (1963): Es un diluido complementario al MS. Se elaboró para cultivo de raíces de tomate.

Macronutrientes
Ca(NO3)24H2O	0.3 g/l
KNO3	0.08 g/l
MgSO4.7H2O	0.72 g/l
Na2SO4	0.2 g/l
NaH2PO4.H2O	0.019g/l
Micronutrientes
KCl	65 mg/l
KI	0.75 mg/l
H3BO3	1.3 mg/l
MnSO4.7H2O	7 mg/l
ZnSO4.7H20	3 mg/l
Na2MoO4.2H2O	0.25 mg/l
CuSO4.5H2O	0.025 mg/l
CoCl2.6H2O	0.025 mg/l
Na2.EDTA	37.3 mg/l
FeSO4.7H2O	27.8 mg/l

4.    Medio Gamborg (B5): Gamborg trabajó activamente en la elaboración de medios, a los que dio diferentes números. EL B5 fue formulado para cultivo de callo de soja.

Macro
(NH4)2SO4	0.134 g/l
KNO3	2.528 g/l
MgSO4.7H2O	0.246 g/l
CaCl2.aq	0.15 g/l
KH2PO4	0.15 g/l
Micro
KI	0.75 mg/l
H3BO3	3.0 mg/l
MnSO4.H2O	10 mg/l
ZnSO4.7H20	2.0 mg/l
Na2MoO4.2H2O	0.25 mg/l
CuSO4.5H2O	0.025 mg/l
CoCl2.6H2O	0.025 mg/l
Na2.EDTA	37.3 mg/l
FeSO4.7H2O	27.8mg/l

5.    Medio Heller: este medio es usado para semillas  de Duraznero, Prumus pérsica sin endocarpio.

ZNSO₄. 7H₂O               1 mg/L                   

H3BO3                          1 mg/L

MnSO₄. 4H₂O               0.10 mg/L

CuSO₄. 5H₂O             1.03  mg/L                    

Al Cl ₃                         0.03 mg/L

NiCl₂.6H₂O                 0.03  mg/L    

KI                                0.01 mg/L

6.    Medio E-24

Sales B5
BAP	0.5 mg/L
ANA	1.0 mg/L
2,4-D	1.0 mg/L
m-Inositol	160 mg/L
Sacarosa	20 mg/L
Agar	8 mg/L
pH	5.6

7.    Medio J-19

Sales B5
Cinetina	1.0 mg/L
ANA	1.0 mg/L
m-Inositol	160 mg/L
Sacarosa	20 mg/L
pH	5.6

8.    Medio G-4

Sales B5
2,4-D	1.0 mg/L
BAP	0.5 mg/L
AIA	0.5 mg/L
Sacarosa	2.0 %

9.    Medio D2a.

Medio VK-M	1.0 mg/L
ANA	1.0 mg/L
2,4-D	0.2 mg/L
ZEA	0.5 mg/L

10. Medio E-10

Sales B5
2,4-D	1.0 mg/L
BAP	0.5 mg/L
AIA	0.5 mg/L
Glucosa	0.5  mg/L
Sacarosa	20%

Medios indefinidos

Las substancias naturales de las plantas ampliamente usadas son: de agua de coco (10-20%), extractos de levadura se emplea en concentraciones de 0.01-0.05%, caseína hidrolizada se emplea desde 0.01% a 1.0% y extracto de malta que se adiciona desde 0.1 –0.5% también se usa peptona, jugo de tomate, pepino, del endospermo inmaduro de maíz y ácido casaamino.

 Estas sustancias son por lo general, termoestables. La adición del endospermo inmaduro de coco a los medios nutrimentales promueve el crecimiento de tejidos de diversas plantas. Cuando se usa extracto de levadura se debe tener cuidado en las diferentes calidades de los extractos, ya que de estos depende la certeza de los datos. Sin embargo, el agua de coco es una mezcla muy compleja cuyos componentes y concentraciones son muy variables, dependiendo de la estación del año y sitio de la colecta. Del endospermo inmaduro de maíz se aíslan la zeatina, una  de las citocininas, que puede ser un acelerador en el endospermo. La actividad de esta Citocinina también se encuentra en semillas inmaduras de lupino, en extracto de levadura y agua de coco.

1.     Preparación de Agar con extracto de malta

·         Extracto de Malta 10 g

·         Agar-Agar 15 g

Procedimiento:

Se pesan los ingredientes y se mezclan en el matraz con 1000 ml de agua destilada. La suspensión se calienta y agita hasta que queden totalmente disueltos los ingredientes.

2.    Agar jugo V-8

·         Jugo V-8

·         Carbonato de calcio

·         Agar-Agar

·         Agua destilada

Biotecnología y mejoramiento vegetal II  Editores: Viviana Echenique, Clara Rubinstein, Luis Mroginski, Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria (Argentina)

Colaborador: Consejo Argentino para la Información y el Desarrollo de la Biotecnología

Editor: Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria, 2010  Pp. 21-22